ELISA实验时竞争法检测抗-HBe实验原理

一、实验原理

用抗-HBe包被固相载体后，同时加被检血清和合适滴度中和试剂HBeAg，若被检血清中含有抗-HBe，则与包被抗-HBe竞争结合HBeAg，被检标本中抗-HBe越多，HBeAg被结合越多，而与包被抗-HBe结合就越少，加底物后显色就越浅；反之越深。

二、主要试剂与器材

ELISA试剂盒：内含已包被抗-HBe板条、HRP-抗HBe溶液、中和试剂HBeAg溶液、阳性和阴性对照血清，底物溶液（A液、B液）、终止液、洗涤液。

三、结果分析

1.P/N≤0.3为阳性。P/N＞0.3为阴性。

2.P/N=待检血清OD值/阴性对照OD值。

四、注意事项

1.试剂置2-4℃保存。取用时应先置室温平衡。干包被板条须密封防潮，冻存，取用后余者及时封存。

2.恰当选好HBeAg的浓度。

3.试剂用前应摇匀。

五、操作步骤

1.加样：取出干包板条，按编号顺序分别加50μl待检血清、阴性对照血清和阳性对照血清于相应孔中。设空白对照孔，除此孔外，每孔加HBeAg50μl、HRP-抗HBe50μl，振荡混匀后，置43℃（或37℃）温育1h。

2.洗涤：甩去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置20s，甩干。如此重复洗涤4次，在吸水纸上拍干。

3.显色：每孔加显色剂A、显色剂B各50μl，振荡混匀后置37℃避光显色10-15min。

4.终止：每孔加终止液50μl，振荡混匀。

5.酶标仪检测：选用450nm波长，用空白孔调零之后测各孔OD值。