植物9-顺式环氧类胡萝卜素双加氧酶(NCED)elisa检测试剂盒 操作
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植物9-顺式环氧类胡萝卜素双加氧酶（NCED）ELISA检测试剂盒

产品简介

一、产品概述

植物9-顺式环氧类胡萝卜素双加氧酶（NCED）ELISA检测试剂盒是一种基于双抗体夹心法原理的免疫分析检测工具。该试剂盒专为快速、高灵敏度、高特异性地定量检测植物组织（如叶片、根、种子等）提取液中的NCED蛋白的含量而设计。NCED是植物脱落酸（ABA）生物合成途径中的限速酶，因此该试剂盒是研究植物逆境响应（如干旱、盐胁迫）和种子休眠的核心工具。

检测目标物： 9-顺式环氧类胡萝卜素双加氧酶（NCED）。

检测类型： 双抗体夹心法ELISA。

核心应用： 植物逆境生理学、植物激素生物学、作物遗传育种、种子生物学。

二、检测意义与生物学背景

核心限速酶： ABA被称为“应激激素"，在植物应对干旱、高盐、低温等非生物胁迫中起核心作用。NCED催化ABA合成途径的关键限速步骤，其活性和含量直接调控植物体内ABA的合成水平。

研究价值：

干旱胁迫响应： 当植物缺水时，NCED基因表达和蛋白含量迅速上调，导致ABA大量积累，从而促使气孔关闭以减少水分蒸腾。检测NCED蛋白含量是衡量植物胁迫响应强度的直接指标。

种子休眠与萌发： NCED调控的ABA水平对维持种子休眠至关重要。

作物改良： 通过筛选或培育NCED表达模式优化的作物品种，可以提高作物的抗旱性和水分利用效率。

三、检测原理：双抗体夹心法ELISA

包被： 微孔板孔中预包被了能特异性结合植物NCED蛋白的捕获抗体。

加样与结合： 加入待测的植物蛋白提取液。如果样本中含有NCED蛋白，它会与孔底的捕获抗体特异性结合。

洗涤： 洗去样本中所有未结合的其他蛋白质和杂质。

加检测抗体： 加入另一种针对NCED蛋白不同表位的酶标检测抗体。该抗体也会与NCED结合，形成“捕获抗体-NCED-酶标检测抗体"的“三明治"复合物。

再次洗涤： 洗去未结合的酶标检测抗体。

显色： 加入底物溶液（如TMB），酶催化反应产生蓝色。

终止与测定： 加入终止液，颜色由蓝变黄。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值）。OD值与样本中NCED的蛋白质浓度成正比。

四、产品特点与优势

高特异性： 抗体针对目标植物（如拟南芥、水稻、玉米等）的NCED蛋白特定区域设计，与植物提取液中的其他蛋白交叉反应性低。

高灵敏度： 检测下限通常可达pg/mL级别，能够检测植物样本中微量的NCED蛋白。

直接定量蛋白含量： 检测的是NCED的蛋白质含量，适用于研究翻译水平调控，与mRNA水平检测（如qPCR）互为补充。

高通量： 可同时分析大量样本，非常适合研究不同胁迫处理、不同时间点、不同基因型植株中NCED蛋白的动态变化。

五、适用范围/检测样本

植物材料： 拟南芥、水稻、玉米、小麦、大豆等模式植物或农作物的叶片、根系、种子等。

样本前处理： 需先将植物组织在液氮中迅速研磨成细粉，然后用预冷的蛋白提取缓冲液（含蛋白酶抑制剂）进行萃取，离心后取上清液进行检测。

六、操作流程简介

样本制备： 称重、液氮研磨、蛋白提取、离心。

加样： 将NCED标准品（已知浓度）和待测样本加入微孔中。

孵育与洗涤： 孵育使抗原抗体结合，然后洗涤。

加酶标抗体、再次孵育与洗涤。

显色： 加入底物，避光反应。

终止与测定： 加入终止液，读取OD值。

结果计算： 绘制标准曲线，计算样本中NCED浓度，并换算成单位重量组织中的含量（如pg NCED / mg 鲜重）。

七、重要注意事项

与酶活性检测的区别： 此试剂盒检测的是NCED的蛋白质量。如需了解其功能性活性，需使用基于其催化反应（检测产物）的酶活性检测试剂盒。两者结合能更全面地了解NCED的功能状态。

物种特异性： 不同植物物种的NCED蛋白序列存在差异。购买前务必确认试剂盒所采用的抗体与您的实验植物物种是否兼容。

样本处理： 整个制备过程需在低温（冰上）操作，并使用蛋白酶抑制剂，以防止蛋白降解，确保结果准确。

植物9-顺式环氧类胡萝卜素双加氧酶（NCED）ELISA检测试剂盒