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植物麦豆球蛋白ELISA检测的实验流程

更新时间:2026-06-29点击次数:50
植物麦豆球蛋白ELISA检测试剂盒是一种基于双抗体夹心法原理的免疫分析检测工具。该试剂盒专为快速、高灵敏度、高特异性地定量检测植物组织(如小麦籽粒)提取液中的麦豆球蛋白的含量而设计。它是研究谷物种子贮藏蛋白组成、评估谷物营养品质和进行育种筛选的重要工具。
实验前准备:
所有试剂提前从2-8℃冷藏环境取出,‌室温平衡20min‌,20×浓缩洗涤液按1:20比例用蒸馏水稀释备用。
提前完成样本预处理:植物组织用预冷PBS匀浆,5000×g离心取上清,避免样本溶血、反复冻融,不合格样本直接弃用。
提前调试酶标仪,确认450nm检测通道正常,准备好封板膜、吸水纸等耗材。
标准操作流程:
从平衡完成的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封后放回4℃环境保存。
设置标准品孔、样本孔和空白孔:标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加任何试剂。
除空白孔外,所有孔中加入HRP标记的检测抗体100μL,封板膜密封后,37℃恒温箱避光温育60min。
弃尽孔内液体,在吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min后甩干,重复洗板5次,拍干残留液体。
每孔依次加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
每孔加入终止液50μL,15min内完成450nm波长下的各孔OD值测定。
结果计算与质量控制:
以标准品OD值为横坐标、对应浓度为纵坐标绘制标准曲线,代入样本OD值计算出实际浓度。实验需设置复孔,复孔CV值控制在10%以内,保证数据重复性。
 
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