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ELISA试剂盒的核心组成

更新时间:2026-07-07点击次数:32
ELISA试剂盒是基于酶联免疫吸附试验原理的实验室检测工具,可精准定量或定性检测生物样本中的特定蛋白质、抗体等目标分子。
ELISA试剂盒通常包含以下关键组分,不同类型的试剂盒(如夹心法、间接法等)可能略有差异:
包被板:表面包被有特异性抗体(或抗原)的96孔(材质多为聚苯乙烯),用于捕获样本中的目标分子。
标准品/校准品:已知浓度的目标分子(如重组抗原、纯化抗体),用于绘制标准曲线,量化样本中目标分子的浓度。
检测抗体:针对目标分子的特异性抗体(常与酶标记,如HRP辣根过氧化物酶、AP碱性磷酸酶)。
酶结合物稀释液:用于稀释酶标记抗体的缓冲液。
底物溶液:酶催化的底物(如HRP对应的TMB显色液、OPD显色液;AP对应的PNPP显色液),反应后生成有色产物。
终止液:终止酶促反应,固定显色结果。
洗涤液(PBST或TBST):用于洗去未结合的非特异性物质,减少背景干扰。
封闭液:包被后封闭微孔板未结合位点,防止非特异性吸附。
样本稀释液:用于稀释待测样本(如血清、血浆、组织匀浆等),匹配反应体系。
操作注意事项:
为确保检测结果的准确性和重复性,需注意以下关键点:
样本处理:避免溶血、脂血或溶菌酶干扰;样本需按说明书要求稀释。
温育条件:严格控制温度(通常37℃)和时间(30分钟-2小时),避免温度波动或时间不足/过长。
洗涤操作:洗涤不充分会导致背景高,过度洗涤可能洗脱结合物;建议使用洗板机(设置5次洗涤,每次30秒)。
显色控制:底物需避光保存,显色时间需根据样本浓度调整。
对照设置:必须设置空白对照、阴性对照、阳性对照及标准品,用于验证实验有效性。
 
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