人信号素4D(SEMA4D)elisa试剂盒 说明书 的标准操作说明概要,供参考。具体步骤请以实际试剂盒说明书为准。
一、实验前准备
试剂与材料
- 试剂盒(含标准品、检测抗体、酶标板、底物A/B、终止液、洗涤液、封板膜等)。
- 样本(血清、血浆、组织匀浆液等)。
- 37℃恒温箱、离心机、移液器、洗板机(或手动洗板)、酶标仪(450nm波长)。
样本处理
- 血清/血浆:离心分离(3000×g,10分钟),取上清液。
- 组织匀浆:匀浆后离心(5000×g,10分钟),取上清。
- 样本需避免反复冻融,4℃短期保存或-80℃长期保存。
二、操作步骤
1. 标准品配制
- 将标准品冻干粉用稀释液复溶,按说明书梯度稀释(如0、10、20、40、80 pg/mL)。
2. 加样
- 每孔加入100 μL样本或标准品,设空白孔(仅加稀释液)。
- 覆盖封板膜,37℃孵育90分钟。
3. 洗涤
- 弃去孔内液体,每孔加350 μL洗涤液,静置30秒后弃去,重复3次。拍干残留液体。
4. 检测抗体孵育
- 每孔加入100 μL生物素化抗体工作液,37℃孵育60分钟。
- 洗涤3次(同步骤3)。
5. 显色反应
- 每孔加入100 μL酶结合物(HRP标记),37℃避光孵育30分钟。
- 洗涤5次(chedi去除洗涤液)。
6. 终止反应与读数
- 每孔加50 μL终止液,15分钟内用酶标仪在450nm波长测定OD值。
三、结果计算
- 绘制标准曲线
- 以标准品浓度为横坐标,OD值为纵坐标,拟合标准曲线(常用Logistic四参数模型)。
- 样本浓度计算
四、注意事项
- 严格避免交叉污染,加样时更换枪头。
- 洗涤步骤需chedi,避免残留影响信号。
- 标准品和试剂需恢复至室温后再使用。
- 终止液具有腐蚀性,操作时需戴手套。
- 若OD值超出标准曲线范围,需调整样本稀释比例。

人信号素4D(SEMA4D)elisa试剂盒 说明书
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